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ISSN : 1229-1153(Print)
ISSN : 2465-9223(Online)
Journal of Food Hygiene and Safety Vol.34 No.1 pp.22-29
DOI : https://doi.org/10.13103/JFHS.2019.34.1.22

Development of Analytical Method for Detection of Fungicide Validamycin A Residues in Agricultural Products Using LC-MS/MS

Ji-Su Park, Jung-Ah Do*, Han Sol Lee, Shin-min Park, Sung Min Cho, Hye-Sun Shin, Dong Eun Jang, Myong-Shik Cho1, Yong-hyun Jung, Kangbong Lee
Pesticide and Veterinary Drug Residues Division, Food Safety Evaluation Department, National Institute of Food and Drug Safety Evaluation, Ministry of Food and Drug Safety, Cheongju, Korea
E-mail: jado@korea.kr
*Correspondence to: Jung-Ah Do, Pesticide and Veterinary Drug Residues Division, Food Safety Evaluation Department, National Institute of Food and Drug Safety Evaluation, Ministry of Food and Drug Safety, Cheongju, Chungcheongbuk-do 28159, Korea Tel: 82-43-719-4211, Fax: 82-43-719-4206
November 15, 2018 December 24, 2018 December 25, 2018

Abstract


Validamycin A is an aminoglycoside fungicide produced by Streptomyces hygroscopicus that inhibits trehalase. The purpose of this study was to develop a method for detecting validamycin A in agricultural samples to establish MRL values for use in Korea. The validamycin A residues in samples were extracted using methanol/water (50/50, v/v) and purified with a hydrophilic-lipophilic balance (HLB) cartridges. The analyte was quantified and confirmed by liquid chromatograph-tandem mass spectrometer (LC-MS/MS) in positive ion mode using multiple reaction monitoring (MRM). Matrix-matched calibration curves were linear over the calibration ranges (0.005~0.5 ng) into a blank extract with R2 > 0.99. The limits of detection and quantification were 0.005 and 0.01 mg/kg, respectively. For validation validamycin A, recovery studies were carried out three different concentration levels (LOQ, LOQ × 10, LOQ × 50, n = 5) with five replicates at each level. The average recovery range was from 72.5~118.3%, with relative standard deviation (RSD) less than 10.3%. All values were consistent with the criteria ranges requested in the Codex guidelines (CAC/GL 40-1993, 2003) and the NIFDS (National Institute of Food and Drug Safety) guideline (2016). Therefore, the proposed analytical method is accurate, effective and sensitive for validamycin A determination in agricultural commodities.



LC-MS/MS를 이용한 농산물 중 살균제 Validamycin A의 시험법 개발

박지수, 도정아*, 이한솔, 박신민, 조성민, 신혜선, 장동은, 조명식1, 정용현, 이강봉
식품의약품안전처 식품의약품안전평가원 식품위해평가부 잔류물질과,1광주지방식품의약품안전청 유해물질분석과

초록


    Ministry of Food and Drug Safety
    18161식품위013

    발리다마이신 에이(Validamycin A)는 1972년 Takeda chemical industries사에서 개발한 Aminoglycoside계 항생 제로 Streptomyces hygroscopicus에 의하여 생성되며 이탄 당인 균당을 2개의 포도당으로 분해하는 trehalase의 작용 을 저해하여 균 증식을 억제한다. 발리다마이신은 A~H로 구성되어 있으며 그 중 가장 활성이 강한 것은 A이다(Fig. 1)1). 발리다마이신 에이는 벼의 도열병 예방에 효과가 있 는 것으로 알려져 있으며, 합성농약과 다르게 환경에 무 해하며 침투성이 높고 선택성이 우수하여 널리 사용되고 있다2). 우리나라에서는 벼, 고추, 복숭아, 마늘, 양파, 참다 래 등에 세균성 병해를 방제하기 위해 농약으로 등록되어 있으며3) 잔류허용기준(Maximum Residue Limit, MRL)은 2019년 신설될 예정이다. 일본에서는 잔류허용기준이 감 자 등 43품목에서 0.05-0.06 mg/kg으로 설정되어 있고 유 럽의 경우 불검출 기준인 0.01 mg/kg으로 일률 기준을 적 용하고 있다. 미국의 경우 zero tolerance를 적용하고 있고 Codex에서는 기준이 설정되어 있지 않다4-6). 잔류물의 정 의는 농산물의 경우 일본에서는 발리다마이신 에이로 규 정하였으며 국내에서도 발리다마이신 에이로 규정하여 관 리할 예정이다.

    발리다마이신 에이의 농산물 중 잔류시험법에 관한 선 행연구로는 Chuanxian7)등이 쌀, 버섯, 아몬드, 배추, 토마 토, 시금치 등의 시료에서 메탄올/물 혼합액을 이용하여 추출 후 HLB (hydrophilic-lipophilic balance) 카트리지를 이용하여 정제하고 LC-MS/MS로 분석한 연구가 보고되었 으며, Chenchen8)등은 사과, 오이, 가지, 상추, 및 양배추에 서 HLB 및 SCX (Strong cation exchange) 카트리지를 이 용하여 정제하는 분석법을 보고하였다. 또한 Na9)등은 볏 집 및 현미, 쌀겨의 시료에 메탄올/물 혼합액을 가하여 추 출 후 추출액에 흡착제를 넣어주어 간섭물질들을 흡착하여 제거하는 분석법인 QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe) 방법을 이용하였다10). 흡착제 로는 C18, GCB (graphitized carbon black) 및 PSA (primary secondary amine)을 첨가하여 간섭물질을 제거하였으며 회 수율은 77.7~94.3%로 우수하였다. 국내 연구의 경우 Han2) 이 파프리카, 브로콜리, 배추, 쌀 등에서 물을 가하여 추 출하였으며, WCX (weak cation exchange)를 이용하여 정 제한 방법이 보고되어 있으나 발리다마이신 에이에 대한 선행연구가 많지 않은 편이다. 한편, Cho11)등과 Kang12)등 은 축산 식품 시료에서 aminoglycoside계 항생제에 대하여 10 mM phosphate buffer를 이용하여 추출 후 HLB 및 WCX 카트리지를 이용하여 정제하는 분석법이 보고되었 지만 적용 범위가 축산물 시료에 한정되어져 있다. 따라 서 본 연구에서는 국내 농산물 중 잔류허용기준 신설에 따라 식품공전상 대표 농산물로 분류하고 있는 곡류(현미), 서류(감자), 두류(대두), 과일류(감귤), 채소류(고추)에 적용 하여 발리다마이신 에이의 적부판정을 위한 공정시험법을 개발하고자 하였다.

    Materials and Methods

    시약 및 재료

    발리다마이신 에이(95.0%) 표준품은 Wako (Osaka, Japan) 사에서 구입하여 사용하였고, 아세토니트릴 (ACN), 메탄 올 (MeOH) 등은 HPLC 등급으로 Merck (Darmstadt, Germany)사에서 구입하여 사용하였다. 또한, 고상추출 (solid phase extraction, SPE) 카트리지 (cartridge)는 hydrophiliclipophilic balance (HLB, 1 g, 6 cc)로 Waters (Milford, MA, USA)에서 구입하여, 활성화 과정을 거쳐 추출물을 흡착시킨 후 용출하는 과정에 사용하였고 아세트산암모늄 (Ammonium acetate)은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) 에서 구입하였다. Syringe filter (PVDF, 0.2 μm × 13 mm) 는 Teknokroma (SantCugat Del Valles, Barcelona, Spain) 에서 구입하여 사용하였다. 시료는 교반진탕장비 (MMV- 1000W, Eyela, Tokyo, Japan)를 사용하여 추출하였다. 시 료는 식품공전상 대표농산물 5종인 현미(곡류), 감자(서류), 대두(두류), 감귤(과일류), 고추(채소류) 모두 무농약 농산 물을 구입하여 균질화한 후 밀봉된 용기에 담아 −50°C에 보관하고 실험에 사용하였다.

    표준원액 및 표준용액의 조제

    발리다마이신 에이 표준품을 메탄올 용해하여 1,000 μg/ mL의 표준원액을 조제하였다. Matrix-matched calibration 을 위해 각 농산물 시료의 무처리 추출물 900 μL에 10 μg/ mL 표준용액 100 μL를 넣어 1 μg/mL 표준용액을 조제 한 뒤 무처리 추출액을 이용하여 단계적으로 희석하여 90% 이상의 matrix가 첨가된 matrix-matched 표준용액 을 조제하였다. 발리다마이신 에이는 유리에 서서히 흡 착할 가능성이 있는 물질로 모든 시험과정은 폴리프로 필렌으로 된 용기에 담아 4°C에 보관하여 실험에 사용 하였다12).

    추출 및 정제

    본 실험에 앞서 과일류, 서류 및 채소류는 약 1 kg을 분 쇄하고, 곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm 를 통과하도록 분쇄하였다. 시료 5 g을 폴리프로필렌 재질 의 용기에 정밀히 달아 메탄올/물(50/50, v/v) 10 mL 가한 후 진탕기에서 10 분간 진탕하였다. 4°C, 5,000 G에서 10 분간 원심분리 후 상등액 전량을 취하였다. 다시 메탄올/ 물(50/50, v/v)을 10 mL를 가하여 상기의 추출과정을 반복 하였다. 추출액을 이전의 추출액과 합한 후 부피를 25 mL 로 맞추었다. 메탄올 3 mL와 물 3 mL로 미리 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액의 5 mL를 흡착시켜 받고 물 5 mL 를 용출시켜 받았다. 정제된 용액의 최종 부피를 10 mL로 맞춘 후 syringe filter (PVDF, 0.2 μm)로 여과하여 시험 용 액으로 사용하였다.

    LC-MS/MS 분석조건

    분석기기는 Waters (Milford, MA, USA)사의 액체크로 마토그래피-질량분석기(Liquid Chromatograph-Tamdem mass Spectrometry, Acquity UPLC-Xevo TQ-S)를 사용하였다. 분석용 컬럼은 X-Bridge® Amide (2.1 × 150 mm I.D., 3.5 μm, Waters, Dublin, Ireland)를 이용하여 분리하였다. 컬럼 온도는 40°C를 유지하였으며 이동상으로는 5 mM 아세트산암모늄 함유 물과 아세토니트릴을 이동상으로 사 용하였다. 대상 성분의 이온화법으로는 electrospray ionization (ESI)법의 positive-ion mode를 사용하여 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)을 선택한 후 정량이온(quantification ion) 및 정성이온(qualification ion)을 선택하여 MRM (multiple reaction monitoring) 조건을 확립하였다. LC-MS/ MS 분석 기기조건은 Table 1과 같다.

    시험법의 유효성 검증

    매트릭스(matrix)에 따라서 정량에 큰 영향을 미치므로 매트릭스의 종류에 따라 추출 및 정제방법이 동일하여도 검량선의 기울기, 정확성, 검출한계 및 정량한계가 달라질 수 있으므로 각 매트릭스별 유효성 검증이 필요하다13). 그 러므로 확립된 시험법의 선택성(selectivity), 직선성 (linearity), 정밀성(precision), 정확성(accuracy), 재현성 (reproducibility), 검출한계(limit of dection, LOD), 정량한 계(limit of quanti-fication, LOQ)에 대한 유효성은 식약처 식품의약품안전평가원의 ‘식품등 시험법 마련 표준절차에 관한 가이드라인(2016)’ 및 CODEX 가이드라인(CAC/GL 40-1993, 2003)을 토대로 검증하였다14,15). 직선성 확인을 위하여 발리다마이신 에이 표준용액을 0.001, 0.005, 0.01, 0.02, 0.05 및 0.1 μg/mL 농도가 되도록 무처리 시료 시 험 용액으로 희석하였다. 각 농도 범위에 대한 peak의 면 적을 이용하여 검량선(matrix-matched calibration)을 작성 하였고, 검량선의 결정계수(r2)를 구하였다. 또한 검출한 계와 정량한계는 크로마토그램 상에서 신호 대 잡음비(S/ N ratio)를 각각 3, 10 이상으로 하였다. 시험법의 정확성 및 정밀성을 검증하기 위해 대표 농산물 5종의 무처리 시료에 대하여 발리다마이신 에이의 표준용액을 정량한 계, 정량한계 10배, 정량한계 50배에 해당하는 농도로 처 리하였으며 각각의 농도 및 시료에 대하여 5반복으로 수 행하여 평균과 상대표준편차(relative standard deviation, RSD)를 계산하여 시험법의 정확성과 정밀성 및 반복성 을 평가하였다.

    Results and Discussion

    최적기기분석조건 확립

    발리다마이신 에이는 아미노글리코사이드계 항생물질로 구조상 Chromophore가 없어 UV 흡광도가 약하여 HPLCUVD (Ultraviolet detector)로 분석하기 어렵고 많은 hydroxyl 기가 포함되어 있는 극성화합물(Log Pow= −4.21)이다(Fig. 1). 아미노글리코사이드계 항생물질은 흔히 유도체화 후 형광검출기를 이용한 분석법이 이용되어왔으나16) 시간이 많이 소요되고 실험 과정이 복잡한 단점이 있어 적용되기 가 어렵다. 따라서 선택성이 높고, 최근 농약 PLS (positive list system) 도입에 따른 기준이 엄격해짐에 따라 낮은 정 량한계 설정 및 시료의 간섭물질에 대한 영향을 배제하기 위해 LC-MS/MS를 분석기기로 선정하였다8,9,17). 분석컬럼 은 C18컬럼을 사용할 경우 머무름이 전혀 없어 이온쌍 시 약 트리플로로아세트산(Trifluoroacetic acid, TFA)과 헵타 플로로부티르산(Heptafluorobutyric acid, HFBA)을 사용할 경우 시료 중 분석물질과의 이온교환을 통해 간섭물질과 의 머무름의 차이가 발생하여 분리가 되나 컬럼의 안정화 시간이 많이 소요되고 충진제의 표면에 강하게 흡착하므 로 제거하기 어렵다는 단점이 있다11,12,17,18). Log Pow를 고 려하여 극성물질 분석에 흔히 사용하는 HILIC (Hydrophilic interaction chromatography) 컬럼 및 amide 컬럼을 비교하 여 머무름 시간을 비교한 결과 HILIC 컬럼은 사용시 머 무름 시간이 짧아 간섭 물질과의 분리하는 목적에 적합하 지 않아 머무름을 증가시켜 간섭물질과의 분리할 수 있는 amide 컬럼을 선택하였다. 이동상은 아세트산암모늄 함유 물을 사용시 peak broad 현상이 관찰되어 포름산이나 아 세트산 함유 아세토니트릴을 사용하여 측정하였다. 그 결 과, peak의 모양이 개선되었으나 감도가 떨어지는 것을 확 인하여 산을 포함하지 않는 아세토니트릴과 아세트산암모 늄 함유 물을 선택하였고, 발리다마이신 에이가 머무르는 시간에 물 비율을 높여 peak의 broad 현상을 줄이는 방법 으로 최적의 기기분석 조건을 확립하였다. 아세트산암모 늄과 같은 첨가제는 이동상의 pH와 이온화 효율 제어에 효과적이므로 pH의 영향으로 이온화 형태가 달라지는 발 리다마이신 에이가 시료에 따라 머무름 시간이 달라지는 문제를 해결하기 위해 사용하였다. 평균질량이 497.5 (Exact mass: 497.2)인 발리다마이신 에이 표준용액(0.1 μg/mL)을 일정한 속도(10 μL/min)로 직접 주입한 결과 [M+H]+형태 인 498.2 mass값을 확인하였다. 이후, cone voltage의 변화 (5~60 V)에 따른 최적화 과정을 통해 30 V에서 최대 peak 가 나타남을 확인하였으며, 최적화된 cone voltage에서 분 석의 선택성과 검출강도를 극대화시키기 위하여 MS/MS 분석 시 MRM mode로 분석하였다. Collision cell에서 collision energy를 조절하여 최적의 precursor/product ion pair를 선정하였고, 가장 좋은 감도를 보이는 product ion 을 정량이온(quantification ion), 그 다음으로 크게 검출되 는 product ion을 정성이온(qualification ion)으로 설정하여 확인하였다(Table 1). 또한 시료에 따른 대상 성분의 이온 화 억압 또는 증강현상이 나타날 수 있으므로 시료별로 matrix-matched calibration법에 준하여 정량하였다.

    정제 조건 확립

    Na9)등은 QuEChERS method를 참고하여 발리다마이신 에이를 C18, GCB 및 PSA등의 d-SPE (dispersive solid phase extraction)를 이용하여 정제하였다고 보고하였으나, AOAC 2007.01 및 CEN 15662 method19)를 검토해 본 결 과 대상 성분을 회수할 수 없었다. 이는 추출액에 첨가한 MgSO4가 시료 중의 수분과 발열 반응을 발생하게 되고 이온화 되어진 발리다마이신 에이가 흡착되어 회수하지 못한 것이라고 판단되어진다. 발리다마이신 에이는 분자 내에 다수의 하이드록실기와 하나의 질소 원자를 갖고 있 는 물질로 용매의 pH에 따라 해리도가 달라지는 약염기 성 화합물이다. pH에 따라 분자 내 질소 원자에 protonation 을 할 수 있는 상태(HA+), 수소원자하나가 부족한 상태(A: 이온억압상태)와 분자 내 하나의 하이드록실기의 수소가 부족한 상태(HA−)로 존재하며, 핸더슨-하델바흐식에 의해 pKa와 pH가 같아지는 pH 6.14에서는 HA+와 A의 수가 같 다. HA−는 pH 12.4일 때 20% 정도로 밖에 존재하지 못 하며 A와 HA−의 수가 같아지는 pH는 없기 때문에 발리 다마이신 에이의 pKa는 하나이다(Fig. 2). 분자가 pKa를 가지는 경우에는 보통 일반적으로 잔류농약분석에 사용하 는 플로리실(florisil)이나 실리카(silica) 카트리지보다는 이 온교환 카트리지를 사용하는 것이 정제효율이 높다고 판 단되었으며 많은 문헌들에서도 HLB, WCX 카트리지 및 SCX 카트리지를 이용한 정제과정이 보고 되어있다2,7,8,11,12). 본 시험법에서는 메탄올에 용해된 표준용액을 이용하여 HLB와 WCX 카트리지의 정제효율을 검토한 결과 WCX 카트리지의 경우 산을 첨가한 메탄올로 2회 용출하였으나 용출되지 않았으며 HLB 카트리지의 경우 Table 2와 같은 결과를 확인 할 수 있었다. 실험 결과에 따라 5품목의 농 산물 시료에 HLB 카트리지를 적용하였고 이를 통해 다양 한 매트릭스 간섭물질로부터 발리다마이신 에이를 효과적 으로 정제할 수 있었다.

    추출 조건 확립

    발리다마이신 에이는 유기용매에 낮은 용해도를 보이나 비교적 메탄올(62.3 g/L)에 높은 용해도를 보이며 물에 대 한 용해도는 610 g/L (20°C)로 메탄올과 물 혼합액을 추 출 용매로 사용하여 비교하였다. 감귤, 감자, 고추 시료 를 적용한 결과 메탄올/물(90/10, v/v)을 이용한 추출에서 회수율이 가장 높았다(Table 3). 건조시료의 경우 수용성 유기용매인 아세토니트릴, 메탄올 등에 의한 추출 효율이 낮아 추출 전에 물을 첨가하는 습윤화 과정이 필요하기 때문에20) 대두를 이용하여 습윤화의 유무에 따른 추출 효 율을 비교하였다. 메탄올/물(90/10)을 추출 용매로 사용시 습윤화를 진행하는 것이 회수율이 더욱 높았지만 메탄올 /물(50/50)을 추출 용매로 사용시 습윤화 유무와 관계없 이 추출 효율이 81.0% 이상으로 우수하였다(Table 4). 이 는 습윤화 과정을 생략하여도 추출 용매에 함유된 물이 건조시료를 습윤화하는데 충분하기 때문에 추출용매로 사 용하기 적합하다고 판단하였다. 감귤, 감자, 고추의 경우 메탄올/물(50/50, v/v)을 추출 용매로 사용시 회수율이 낮 아 pH를 조절하여 추출 효율을 높이고자 하였으나 69.9~ 79.5%로 큰 차이가 없었으며 2회 진탕 추출을 진행함으 로써 회수율이 91.3~96.5%로 추출 효율의 증가하였고 재 현성 있는 결과를 확인할 수 있었다(Table 5). 본 연구는 모든 농산물을 광범위하게 적용할 수 있는 시험법을 개 발하고자 함으로 추출 용매의 단일화를 위하여 메탄올/물 (50/50, v/v)을 이용하여 반복 추출하는 방법으로 선정하 였다.

    시험법 유효성 검증

    발리다마이신 에이의 선택성(selectivity)은 표준용액, 무 처리 시료, 표준용액을 첨가한 회수율 시료의 크로마토그 램을 서로 비교하여 확인하였다. 무처리 시료 중 발리다 마이신 에이의 머무름 시간과 질량 대 전하비(m/z)가 동 일한 간섭물질이 검출되지 않아 본 시험법은 대상 성분을 분석함에 있어 높은 분리능과 선택성을 확인할 수 있었다. 개발된 시험법의 직선성을 확인하기 위하여 표준원액을 무처리 시험용액으로 희석하여 0.001~0.1 μg/mL으로 제조 한 후 5 μL를 LC-MS/MS를 주입하여 분석한 결과 농산물 5종 시료 표준용액에서 결정계수(r2) 0.99이상으로 높은 직 선성을 확인하였다(Fig. 3). 발리다마이신 에이의 검출한계 는 기기의 크로마토그램 상에서 신호 대 잡음비(S/N ratio) 를 3 이상, 정량한계는 10 이상으로 결정하였다. 대표 농 산물 5종에 대하여 분석기기의 최소검출량에 따른 검출한 계는 0.005 mg/kg이었으며, 정량한계는 0.01 mg/kg이었다. 검출한계와 정량한계의 산출식은 아래와 같다.

    검출한계(mg/kg) = 최소검출농도(μg/mL, S/N ≥ 3) ×희석배수1) = 0.0005 ( μg/mL ) × ( 25 ( mL ) 5 ( g ) × 10 ( mL ) 5 ( mL ) ) = 0.05 mg/kg

    정량한계(mg/kg) = 최소정량농도(μg/mL, S/N ≥ 10) × 희석배수1) = 0.001 ( μg/mL ) × ( 25 ( mL ) 5 ( g ) × 10 ( mL ) 5 ( mL ) ) = 0.01 mg/kg

    1)희석배수 = 희석부피(mL)/분취량(mL)

    시험법의 LOQ, LOQ 10배, LOQ 50배 수준인 0.01, 0.1 과 0.5 mg/kg의 처리농도로 5반복 회수율 실험을 통해 시 험법의 정확성과 정밀성(반복성)을 평가하였다. 그 결과 평균 회수율은 72.5~118.3%였으며, 상대표준편차가 10.3% 이하로 확인되었다(Table 6). 따라서 본 연구 결과는 잔류 물 분석에 관한 Codex 가이드라인의 잔류농약 분석 기준 (Codex Alimentarius Commission, CAC/GL 40-1993, 2003) 및 식품의약품안전평가원 ‘식품등 시험법 마련 표준절차 에 관한 가이드라인(2016)’에 부합하므로14,15) 농산물 중 잔 류하는 발리다마이신 에이를 분석하는데 적합함을 확인할 수 있었다. 농산물 5종에 대한 회수율 크로마토그램은 다 음과 같다(Fig. 4).

    실험실간 시험법 검증

    시험법의 유효성을 확인하기 위해 외부 실험기관인 광 주지방식품의약품안전청과 실험실간 검증을 수행하고자 개발한 시험법을 제공한 후 동일한 방법으로 분석을 수행 하여 회수율 및 표준편차를 비교하였다. 검증 결과 각 농 도별 발리다마이신 에이의 평균 회수율은 70.9~117.7%이 었고, RSD는 7.9% 이하로 조사되었다(Table 6). 두 실험 실간 회수율 결과에 따른 평균값은 75.9~112.7%이며 RSD 는 18%미만으로 모든 처리구에서 Codex 가이드라인(CAC/ GL 40-1993, 2003)14) 및 식품의약품안전평가원의 가이드 라인(2016)15)에서 제시한 기준 처리농도 > 1 μg/kg, ≤ 0.01 mg/kg의 46%, 처리농도 > 0.01 mg/kg, ≤ 0.1 mg/kg의 34%, 처리농도 > 0.1 mg/kg, ≤ 1 mg/kg의 25%보다 낮아 적합한 것으로 확인되었다.

    Acknowledgement

    본 연구는 2018년도 식품의약품안전평가원 “2018년 식 품 중 잔류농약 안전관리를 위한 위해평가 및 신규 시험 법 확립 연구(18161식품위013)”의 연구개발비 지원에 의 해 수행되었으며, 이에 감사드립니다.

    Figure

    JFHS-34-1-22_F1.gif

    Structures of validamycin A to H.

    JFHS-34-1-22_F2.gif

    pKa graph of validamycin A.

    JFHS-34-1-22_F3.gif

    Matrix-matched calibration curves of corresponding to validamycin A in (A) hulled rice, (B) potato, (C) soybean, (D) mandarin and (E) green pepper.

    JFHS-34-1-22_F4.gif

    Representative MRM(quantification ion) recovery chromatogram (fortification concentration: 0.1 mg/kg) of validamycin A (m/z 498→178) in (A) hulled rice, (B) potato, (C) soybean, (D) mandarin and (E) green pepper at (1) matrix-matched standard, (2) control and (3) recovery.

    Table

    LC-MS/MS parameters for the analysis of validamycin A

    Comparison of solvent ratio on validamycin A elution efficiency using HLB cartridge

    Comparison of solvent ratio on validamycin A extraction efficiency

    Comparison of extraction efficiency by wetting in soybean

    Comparison of extraction efficiency by repeat shaking

    Inter-laboratory validation results of analytical method for validamycin A in samples

    Reference

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